Kromatografi lapisan tipis adalah kaedah analisis kimia berdasarkan penggunaan lapisan sorben dengan ketebalan 0.1-0.5 mm sebagai fasa pegun. Kaedah TLC dapat digunakan dalam pelbagai bidang dan memungkinkan penentuan sebilangan besar sebatian kimia.
Prinsip kaedah
Kaedah kromatografi lapisan nipis lahir dari kromatografi kertas dan eksperimen pertama dilakukan pada tahun 80-an abad ke-19. Penggunaan aktif analisis ini bermula hanya selepas tahun 1938.
Teknik TLC merangkumi fasa bergerak (eluen), fasa pegun (sorben), dan analit. Fasa pegun digunakan dan dipasang pada plat khas. Plat boleh dibuat dari kaca, aluminium atau plastik - ini adalah substrat yang boleh digunakan semula yang mesti dicuci, dikeringkan dan disiapkan dengan teliti untuk penggunaan sorben selepas setiap penggunaan. Anda juga boleh menggunakan pinggan kertas yang dibuang setelah digunakan.
Silika gel paling sering digunakan sebagai fasa pegun, tetapi mungkin menggunakan sorben lain, misalnya, aluminium oksida. Semasa menggunakan sorben ini atau sorben, teknologi mesti dipatuhi dengan ketat agar hasilnya tepat, misalnya, kerana silika gel dapat memberikan hasil yang salah jika udara di makmal terlalu lembap.
Pelarut digunakan sebagai fasa bergerak, misalnya, air, asid asetik, etanol, aseton, benzena. Pemilihan pelarut mesti diambil secara bertanggungjawab, kerana hasil kromatografi secara langsung bergantung pada kualitinya (kelikatan, ketumpatan, kemurnian). Pelarut individu dipilih untuk setiap sampel yang dianalisis.
Analisis
Sampel mesti dicairkan dalam pelarut. Sekiranya pembubaran lengkap tidak berlaku dan terlalu banyak kekotoran tetap ada, maka sampel dapat dibersihkan dengan pengekstrakan.
Pemakaian sampel ke piring boleh dilakukan secara automatik atau manual. Aplikasi automatik menggunakan kaedah microspray di mana setiap sampel disembur ke kawasan substrat yang sesuai. Untuk aplikasi manual, mikropipet digunakan. Tanda pensil diletakkan di atas pinggan untuk setiap sampel. Setiap sampel diaplikasikan dengan kapilari ke plat dalam satu baris pada jarak yang cukup dari tanda supaya tidak bertindak balas dengan karbon dari plumbum.
Plat diletakkan di dalam bejana, di bahagian bawahnya eluen dituangkan. Sokongan diletakkan dengan satu tepi ke dalam kapal hingga garis yang ditandai. Kapal ditutup rapat untuk mengelakkan penyejatan fasa bergerak. Di bawah tindakan daya kapilari, eluen mula naik ke lapisan sorben. Apabila eluen mencapai tahap tertentu, plat dikeluarkan dari kapal dan dikeringkan.
Sekiranya bahan yang diinginkan tidak mempunyai warna, maka bahan tersebut tidak akan dapat dilihat pada substrat. Oleh itu, visualisasi dilakukan - pemprosesan plat dengan wap yodium atau pewarna lain.
Selepas pemprosesan tersebut, hasilnya dinilai. Kawasan berwarna dengan intensiti yang berbeza-beza muncul pada sorben. Untuk menentukan bahan (atau sekumpulan bahan), kawasan berwarna, ukuran, intensiti dan pergerakannya dibandingkan dengan sampel rujukan.
Kaedah TLC banyak digunakan kerana cepat, murah, tepat, intuitif, tidak memerlukan peralatan yang kompleks, dan senang ditafsirkan.
